Bradford 法蛋白定量試劑盒產(chǎn)品介紹
Bradford法蛋白定量試劑盒是在世界上常用的蛋白濃度檢測(cè)方法之一Bradford法基礎(chǔ)上(考馬斯亮藍(lán)結(jié)合顯色法)改進(jìn)而成。當(dāng)Bradford染色液(考馬斯亮藍(lán))和蛋白在酸性條件下結(jié)合時(shí),*大吸光值波長(zhǎng)立刻由465 nm轉(zhuǎn)移至595nm,同時(shí)顏色由褐色轉(zhuǎn)為藍(lán)色,通過(guò)測(cè)定吸光值大小并對(duì)照標(biāo)準(zhǔn)蛋白的吸光值,推算出蛋白濃度。 Bradford 法蛋白定量試劑盒
產(chǎn)品特點(diǎn)
1. 靈敏度高,檢測(cè)濃度下限達(dá)到25μg/ml,*小檢測(cè)蛋白量達(dá)到0.5μg,待測(cè)樣品體積為1-20μl。
2. 檢測(cè)速度極快,10-20個(gè)樣品只需不足10分鐘即可完成。
3. 在50-1000μg/ml濃度范圍內(nèi)有較好的線(xiàn)性關(guān)系。 Bradford 法蛋白定量試劑盒
產(chǎn)品儲(chǔ)存
本產(chǎn)品收到后按照說(shuō)明書(shū)指示溫度存放各成份,至少九個(gè)月內(nèi)有效。
注意事項(xiàng)
1. Bradford染色液含有刺激性或者腐蝕性化合物,操作時(shí)要戴乳膠手套,避免沾染皮膚,眼睛和衣服。若沾染皮膚、眼睛時(shí),要用大量清水或
者生理鹽水沖洗。
2. Bradford染色液中考馬斯亮藍(lán)易聚集成團(tuán),每次使用前請(qǐng)顛倒6-8次并且豎直抓住瓶口做水平劃圈動(dòng)作,旋轉(zhuǎn)瓶中液體,幫助充分混勻,但
不可以上下振蕩混勻。
3. 低溫會(huì)降低Bradford染色液的敏感度,因此每次使用前應(yīng)該使Bradford染色液回復(fù)到室溫。僅僅將需要的Bradford染色液復(fù)溫,可以減少?gòu)?fù)
溫時(shí)間。倒出每次需要的Bradford染色液回復(fù)到室溫,將原瓶放回冰箱。
Bradford 法蛋白定量試劑盒 4. 蛋白標(biāo)準(zhǔn)請(qǐng)?jiān)谌咳芙夂笙然靹?,再稀釋成一系列不同濃度的蛋白?biāo)準(zhǔn)。標(biāo)準(zhǔn)品曲線(xiàn)配制時(shí),如果吸量不準(zhǔn)確或者加樣槍不**會(huì)造成標(biāo)準(zhǔn)
曲線(xiàn)相關(guān)系數(shù)減小,可根據(jù)需要使用倍比梯度稀釋的方法來(lái)配制,或者使用**度高的加樣槍。
5. 由于Bradford法在蛋白濃度增高到一定時(shí)候,顏色反應(yīng)并不成比例增加,因此得到的標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)只是在一定范圍內(nèi)可以近似看成直線(xiàn),每次應(yīng)
按照實(shí)際測(cè)得的標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)計(jì)算出大致**的蛋白濃度。
6. 需要酶標(biāo)儀一臺(tái),*佳檢測(cè)波長(zhǎng)為595nm,也可以在570-610nm之間波長(zhǎng)測(cè)定,但會(huì)降低一些敏感度;并需96孔板。如果沒(méi)有酶標(biāo)儀,也可以
使用普通的分光光度計(jì)測(cè)定,但是測(cè)定蛋白濃度時(shí),需根據(jù)測(cè)定吸光度的杯子的體積,按比例調(diào)整Bradford染色液和樣品的體積。使用分光
光度計(jì)測(cè)定蛋白濃度時(shí),每個(gè)試劑盒可以測(cè)定的樣品數(shù)量可能會(huì)顯著減少
7. Bradford法測(cè)定蛋白濃度不受絕大部分樣品中的化學(xué)物質(zhì)的影響,樣品中巰基乙醇的濃度可高達(dá)1M,二硫蘇糖醇的濃度可高達(dá)5mM。但受略
高濃度的去垢劑影響。需確保SDS低于0.125%,Triton X-100低于0.125%,Tween 20低于0.06%??梢钥紤]用超純水稀釋?zhuān)肝?除鹽,
ACETONE/TCA沉淀蛋白后重溶于超純水等方法來(lái)消除干擾物質(zhì)的影響。