基于金磁—量子點雙標(biāo)記的牛乳酪蛋白快速**檢測新方法研究
汪艷姣
上海師范大學(xué)
摘要：近年來,隨著人們的生活水平日漸提高以及牛乳制品的廣泛普及,牛乳過敏問題得到了人們的廣泛關(guān)注。本論文將量子點良好的光學(xué)特性與金磁微粒可被快速富集的優(yōu)勢相結(jié)合,建立了基于金磁-量子點雙標(biāo)記的牛乳酪蛋白快速**檢測的新方法,主要開展了以下幾個方面的工作:一、以巰基乙酸為穩(wěn)定劑,采用水相合成法成功制備了表面帶有羧基的綠、黃、橙、紅四種熒光顏色的Cd Te量子點;采用一鍋法合成了氨基化的磁性復(fù)合微粒(Fe3O4-PEI),通過兩次包金過程,得到了多層復(fù)合型金磁納米微粒(Fe3O4-PEI-Au1-PEI-Au2)。并對其相關(guān)性能進行了表征與測試,實驗結(jié)果表明,所制備的量子點具有良好的光學(xué)性能,其激發(fā)光譜寬且連續(xù),發(fā)射光譜窄而對稱,熒光強度較高、且不易聚沉;所制備的金磁微粒粒徑均一,具有良好的分散性和晶體結(jié)構(gòu)且磁性好,能很好的用于磁性分離和生物修飾,為本論文后續(xù)的拓展與應(yīng)用研究提供了保證。二、以橙色CdTe量子點為代表,小鼠IgG作為模式抗原,兔抗鼠IgG和羊抗鼠Ig G均作為模式抗體,可與小鼠Ig G上的不同位點相結(jié)合。其中,羊抗鼠Ig G偶聯(lián)Cd Te量子點得到熒光探針,兔抗鼠Ig G偶聯(lián)金磁微粒得到金磁探針,在此基礎(chǔ)上構(gòu)建了金磁-量子點雙標(biāo)記快速**檢測體并優(yōu)化了兩探針的合成條件。金磁探針與小鼠Ig G相結(jié)合,并結(jié)合量子點熒光探針上的兔抗鼠Ig G,*終形成“三明治”式的復(fù)合物。根據(jù)復(fù)合物上熒光強度的大小,從而實現(xiàn)對小鼠Ig G的定量檢測。實驗結(jié)果表明,在優(yōu)化的探針條件下,小鼠Ig G的量與熒光檢測信號呈正相關(guān)。由此說明基于金磁-量子點雙標(biāo)記**檢測體系成立,有望用于實際樣品檢測中。三、在之前研究的基礎(chǔ)上,采用兩種可與牛乳酪蛋白不同作用位點結(jié)合的抗體,將其中單克隆抗體修飾到金磁微粒上作為捕獲探針,多克隆抗體修飾到量子點上作為熒光檢測探針,建立了一種基于“三明治夾心式”的牛乳酪蛋白**檢測新方法,并用于牛乳過敏原的實際檢測。結(jié)果得到酪蛋白含量在6.25~100ng/m L范圍內(nèi)與熒光強度具有良好的線性關(guān)系,*低檢出限為1.8 ng/m L。通過和ELISA方法的對比以及加標(biāo)回收實驗證明本檢測方法準(zhǔn)確性好,穩(wěn)定性強,重復(fù)性佳,可以用于實際樣品的檢測。該金磁-量子點雙標(biāo)記**檢測體系可以為牛乳過敏原的檢測提供理論和現(xiàn)實依據(jù)。
關(guān)鍵詞：牛乳; 過敏原; 酪蛋白; 金磁納米微粒; 量子點; **檢測; 雙標(biāo)記;
導(dǎo)師：魏新林; 王元鳳;
分類號：TS252.7
