細(xì)胞傳代方法您做對(duì)了嗎？

細(xì)胞與試劑方面：

1、細(xì)胞(單層細(xì)胞，鏡檢適合)

2、培養(yǎng)液(MEM-0.2%LH 培養(yǎng)液或MEM 培養(yǎng)液或199 等適合細(xì)胞有要求的培養(yǎng)液)

3、滅活小牛血清、慶大霉素溶液（1 萬(wàn)單位）

4、7.5％NaHC03 溶液

5、0.25％胰蛋白酶

6、 PBS 洗液。

實(shí)驗(yàn)小用具方面：

1、小方瓶(100m1)

2、克氏瓶

3、膠塞

4、吸管(10ml、1m1）

5、細(xì)胞吹打管（20 ml）(以上用具需經(jīng)121℃至少15 分鐘高壓**)

6、C02 孵箱

7、超凈臺(tái)

8、倒置顯微鏡

9、4℃、- 20℃冰箱

細(xì)胞傳代的操作步驟

1、挑選細(xì)胞：鏡檢細(xì)胞，挑選生長(zhǎng)狀態(tài)良好，細(xì)胞界限清晰，具有立體感，形態(tài)好無(wú)污染、無(wú)異常及可疑病變細(xì)胞。

2、配制細(xì)胞培養(yǎng)液：按以下配比配制MEM-0.2%LH 培養(yǎng)液100ml 內(nèi)，加入滅活小牛血清10m1，慶大霉素溶液0.3m1，7.5%碳酸氫鈉溶液3ml。（僅供一般參考）。

3、消化細(xì)胞：先用PBS 洗液沖洗細(xì)胞表面1-2 次，每次10m1，棄去洗液，向細(xì)胞瓶?jī)?nèi)加入0.25％胰蛋白酶溶液，每瓶1m1，細(xì)胞瓶平放，使消化液完全覆蓋細(xì)胞表面。

4、至細(xì)胞完全脫落到胰酶中：每瓶加入10m1 細(xì)胞培養(yǎng)液吹打分散細(xì)胞，按所需的傳代比例分裝于小方瓶(100m1)中，再加入10m1 細(xì)胞培養(yǎng)液重復(fù)吹打一次后分裝，然后補(bǔ)加至所需培養(yǎng)量。

5、加塞，置于37±1℃孵箱培養(yǎng)。約2～4 天成片(由細(xì)胞接種濃度決定)。

6、填寫傳代記錄。